屋塵螨過敏原

背景簡介：

支氣管哮喘（bronchial asthma，簡稱哮喘）是一種以嗜酸性粒細胞、肥大細胞反應為主的氣道變應性炎癥和氣道反應性為特征的疾病。由于哮喘的發病機制復雜，病因與發病機理尚不明了，臨床實驗受倫理及方法限制，因此需要通過構建哮喘動物模型來研究疾病發生發展以及制定相應治療措施。塵螨是最常見的空氣過敏原，全球85%的哮喘患者對塵螨過敏。屋塵螨是一種免疫復合物，能夠激活先天免疫和后天免疫應答。研究表明，HDM中的蛋白酶，如胰蛋白酶樣酶，催過敏有促進作用，從而導致過敏幾天對塵螨的過敏反應。
利用塵螨誘發動物建立哮喘模型，方法簡便，操作性強，且成功率高。

美國Greer 公司專注于過敏原檢測，提供各種動物、植物及食品、真菌等各種過敏原提取物。塵螨過敏原提取物，廣泛應用于哮喘模型的制備。

產品信息：

英文名稱：D.pteronyssinus ( House dust mite, HDM)

中文名稱：屋塵螨

貨號：XPB82D3A2.5  XPB82D3A25  XPB91D3A2.5  XPB91D3A25    XPB81D3A2.5  XPB81D3A25

規格：2.5ml/25ml

產品應用：

1.該產品為凍干粉,一般推薦客戶參照COA中的蛋白濃度做稀釋，客戶收到貨后用去離子水或蒸餾水稀釋至相應工作濃度或儲液濃度。比如：2.5ml包裝的，加入2.5ml水，因為每個批次的蛋白含量有差異，可根據質檢報告，計算終濃度。客戶也可依據自身實驗要求，稀釋到任意濃度。

2.過敏原稀釋后，如果一次用不完，推薦分裝后-20℃保存（可分裝成使用濃度后保存）。可凍融一次，解凍后，在一周內用完。

3.凍干粉過敏原效期為10年。

4.常見的兩個比較相似的產品：B82 和B84，B82 和B84，均只代表D.pteronyssinus，不是實際訂貨貨號，D.pteronyssinus產品分粗制品和凍干粉，實貨都是凍干粉。凍干粉是粗品進一步純化后的產品。B82和B84在粗品階段，只在純度上有細微差別,貨號分別為：RMB82M 和RMB84M。凍干粉的D.pteronyssinus只有XPB82D3A2.5這一個貨號（是由粗品RMB82M純化后獲得。）

參數說明：

收到貨后，會有隨貨的質檢報告（COA）。塵螨過敏原會有4個參數說明，其他類過敏原，如食物、花粉類等過敏原只有2個參數（干重和蛋白含量）說明。

以XPB82D3A2.5(Lot#385930)為例，參數說明：

1）純過敏原（Der P1）： 是指純過敏原Der P1 的含量（當然這個提取物的組分不只是只有Der P1,也有其他形式的，這個是主要的過敏原成分）。154.17mcg/vial 表示 Der P1 的含量是：154.17ug/瓶，mcg, microgram 微克的縮寫。

2）干重（Dry Weight）: 干重16.7mg,  是去除水分后，瓶子里粉末的含量。

3）總蛋白（Protein） ：蛋白含量4.43mg， 是指：過敏原提取物的總蛋白含量。

4）內毒素含量（Endotoxin）：內毒素水平。塵螨有一款低內毒含量（做過內毒素處理），貨號為：XPB91D3A2.5/ XPB91D3A25（之前XPB70D3A2.5/ XPB70D3A25已停產），要比未做過內毒素處理的XPB82D3A2.5/ XPB82D3A25內毒素含量相對低很多（并不是不含內毒素）。

低內毒素的一般用于做細胞實驗，但由于凍干過程中無法保證無菌，如果做細胞實驗，請做過濾除菌（0.22 um ）。

注意：

1）塵螨是提取物，提取物是混合物，不是純蛋白。由于工藝和每批過敏原原料差異，因此每個批次含量（參數）都不同。如果對含量有要求，特別是之前用過別的批次的，沒法保證和之前批次一致，請核對收到貨的COA，確認符合您的要求再開瓶。

2）過敏原提取物是混合物，不能作為標準品，如ELISA實驗中的標準品。

3）參考文獻中用過Greer 產品的，都沒有指出具體的是參照哪個參數？而且不同文獻用量差別也很大，因此沒有標準的方案推薦。客戶需要根據自己的實驗摸索最佳的實驗條件。

如果以純過敏原（Der P1）的含量為基準，成本太高。

如果以：干重（Dry Weight）的含量為基準，實際其中的過敏原的比例太低，不足以致敏。

根據客戶實際使用經驗，客戶驗證過參照Protein 含量做是可以的，因此我們一般推薦客戶以“蛋白含量 Protein"為基準，具體實驗條件客戶需要自己摸索。

關于稀釋、保存:

1) 過敏原提取物均為干粉包裝，不是液體包裝。規格里的2.5ml 或25ml 指的是瓶裝規格。

客戶可以根據實際工作濃度，用蒸餾水稀釋到儲液濃度，比如：蛋白含量是：4.43mg，用：2.5ml 蒸餾水稀釋后，濃度就是：4.43mg/2.5ml=1.772mg/ml。

2) 塵螨干粉效期是10年，干粉室溫或4℃保存。稀釋后分裝-20℃凍存（保證濃度在：0.1mg/ml以上），效期1年。

注意事項：

1.  蛋白含量不是重量， 不要用天平去稱量，這個蛋白含量的測定COA里有說明，是Bradford法測定的，請不要用天平去稱量。如果用天平去稱量了，會導致無法定量，請不要做此操作。例如：您要用50ug 的量，那您可以根據您稀釋后的濃度（比如：1.772mg/ml），可以根據這個算出您取多少體積的量就可以了。這樣是可以準確定量的。

2.  玻璃瓶易碎，請不要置于-80℃保存。

D.pteronyssinus 屋塵螨過敏原

產品引用文獻：

1. D Canbaz.Immunotoxicity of organophosphate flame retardants TPHP and TDCIPP on murine dendritic cells in vitro

2.L Utsch.Allergic sensitization is associated with inadequate antioxidant responses in mice and men.

3.DD Le.Allergic airway inflammation induces the migration of dendritic cells into airway sensory ganglia

4.SJ Tavernier.Opposing regulation and roles for PHD3 in lung dendritic cells and alveolar macrophages

5.John S. House.Genetic variation in HTR4 and lung function: GWAS follow-up in mouse.

6.KK Penberthy.Ex vivo modulation of the Foxo1 phosphorylation state does not lead to dysfunction of T regulatory cells.

7.W Huang.Beyond type 1 regulatory T cells: co-expression of LAG3 and CD49b in IL-10-producing T cell lineages.

8.Matthew T.Mechanism for initiation of food allergy: Dependence on skin barrier mutations and environmental allergen costimulation

9.LO Cruz.Excessive miR-27 expression impairs regulatory T cell-mediated immunological tolerance.

10.T. H. Acciani.Epidermal growth factor receptor signalling regulates granulocyte–macrophage colony‐stimulating factor production by airway epithelial cells and established allergic airway disease.

11.MY Tjota.Signaling through FcRγ-associated receptors on dendritic cells drives IL-33–dependent TH2-type responses.

12.TH Acciani.Diesel exhaust particle exposure increases severity of allergic asthma in young mice.

13.Zhimei Yang.Roles of Bronchopulmonary C-fibers in airway Hyperresponsiveness and airway remodeling induced by house dust mite.

14.MY Tjota.Activation of antigen presenting cells through FcRγ drivesIL-33 dependent Th2-type responses in the lungs.

15.SS Folmsbee.The cardiomyocyte protein αT-catenin contributes to asthma through regulating pulmonary vein inflammation.