BD 產品貨號：354259

儲存和運輸：-20度儲存，干冰運輸。

操作指南：

層粘連蛋白/巢蛋白混合物是EHS小鼠腫瘤基質膜的主要成分。純化后，成等摩爾濃度分布。二價陽離子有利于混合物的形成。在2mg/mL濃度時，層粘連蛋白/巢蛋白可以形成三維膠，可用于細胞生長和分化的研究。三維膠更接近體內微環境。細胞的分化受到與單一或混合細胞外基質蛋白之間的相互作用的影響，因此在層粘連蛋白/巢蛋白混合物上培養細胞，可以用以觀察并揭示細胞分化和功能性的特性機理。混合蛋白的成膠過程對溫度敏感。此外，高濃度的層粘連蛋白/巢蛋白（2-6mg/mL）也用于人下頜腺泡細胞和內皮細胞的血管形成研究。

注意事項：

所有操作的工作溫度不能高于4℃，蛋白需冰上操作保存，用冰塊冷卻的溶液或細胞懸浮液稀釋。由于混合蛋白溶液粘性較高，必須使用預冷的注射器型移液管，如Gilson M系列；避免使用氣壓式移液管或吸頭。

推薦包被方法：

鋪膠步驟：細胞在膠表面培養

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上進行。稀釋到需要的濃度：穩定成膠濃度至少為3.5mg/mL。用預冷的等壓鹽溶液或0.1mM鈣離子培養基稀釋。將稀釋的蛋白溶液加入到培養器皿，1-2小時，37℃成膠。

鋪膠步驟：細胞在膠內部培養

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上進行。根據加樣體積計算并稀釋混合蛋白，成膠濃度至少為3.5mg/mL，稀釋過程需在預冷的培養器皿或小管中進行。加入預冷的細胞懸液，用等壓鹽溶液或培養基調節溶液濃度到第二步所需的濃度。系列移液管混勻混合蛋白和細胞懸液。將混合后的細胞蛋白懸液加入到預冷的培養板中，37℃孵育1-2小時成膠。