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News CenterMatrigel 收貨注意事項,請檢查:
1. 盒子內是否有干冰
2. 基質膠是否呈固態,膠面是否水平
3. 基質膠顏色是否在正常范圍(黃色-粉紅-深紅)
產品特性 :
Martrigel基質會有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2的作用引起的,但是與5%CO2平衡后色差即會減少。
基質膠凍融操作 :
收貨后,若不立刻使用基質膠,應馬上將仍然是冷凍固態的基質膠放進-20℃冰箱保存。使用前須先將基質膠凍融。
凍融:
將基質膠埋于鋪滿碎冰的冰盒中,然后將整冰盒放入4℃冰箱過夜溶解。(普通濃度的基質膠,溶解時間1-2天;高濃度基質膠溶解時間 3-7天)。
分裝:
溶解后的須分裝保存,以避免反復凍融。液態基質膠,會在10℃以上快速成膠(特別是高濃度基質膠),因此,分裝時,接觸到基質膠的耗材必須預冷(如移液管、吸頭、EP管等),并且整個實驗必須無菌、冰上操作。(高濃度的基質膠比較粘稠,用移液器不好吸取,可以使用去掉針頭的預冷注射器吸取。)
保存:
分裝后的基質膠在冰上應仍然呈現液態,此時將基質膠放進-20℃保存即可。進行實驗時,取出分裝好的小管,4℃凍融。若分裝好后基質膠已經凝固,說明分裝操作不能很好地保持低溫,導致基質膠已經成膠,不適宜使用。
普通濃度基質膠操作:
包被與成膠
細胞可在0.5mm厚度的基質膠表面生長,可以在1mm厚度的三維基質內生長。過度稀釋的基質膠會形成非膠質的蛋白層,可以用于細胞貼壁,但不能用于細胞的研究分化。為保證基質膠的成膠性能與穩定,稀釋濃度不應低于1:3,可用預冷無血清培養基稀釋,成膠后立即使用。
薄膠成膠方法:
1. 凍融后,用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 將需要使用的培養板置于冰上,加入濃度為50ul/cm2生長面積的基質膠。
3. 在37℃放置30min,即可使用。
厚膠成膠方法
1. 凍融后,用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 將需要使用的培養板置于冰上,將培養的細胞與基質膠混合,用移液槍頭使其懸浮于基質中。加入濃度為150-200 ul/cm2生長面積的基質膠。
在37℃放置30min,可成膠。也可以加入細胞培養的基質,也可使細胞直接生長在膠表面。
薄層包被方法:
1. 凍融后,用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀。
2. 根據需要,采用無血清培養基稀釋基質膠,根據實驗需要確定*包被濃度。
3. 將稀釋的基質膠包被與所需的培養器皿中,包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面,室溫下孵育1小時。
去除未結合的基質膠,用無血清培養基輕輕地沖洗。備注:普通濃度的基質膠,建議稀釋濃度不低于3mg/ml;我們不能保證稀釋濃度低于3mg/ml能夠成膠。
普通濃度的基質膠,不建議用于成瘤實驗。
BD細胞回收劑354253,離散酶354235,冰浴7小時后回收得到細胞。
腫瘤侵襲實驗:
操作過程
1. 凍融(對于預包被的24孔培養小室請參考1.1-1.3操作,對于自己包被好待用的24孔小室,請直接從步驟2開始)
1.1 從-20℃冰箱中取出產品,使其自然升溫到室溫。
1.2 取出培養板在細胞小室內加入500μL 37℃預熱的PBS,37℃無CO2環境下孵育2小時。
1.3 解凍后,小心去除小室內的培養基,避免破壞Matrigel基質膜。
2. 染色劑后標記法
細胞通過侵襲消化基質膜后遷移到下小室,采用熒光標記定量細胞。細胞的侵襲能力用終點計算法計算得到。對于采用實時動力曲線的計算,推薦使用前標記法。
2.1 如步驟1 準備培養板。
2.2 胰酶消化細胞單層后制得細胞懸液,溶于無血清DMEM培養基,推薦濃度為5×104cells/mL。
2.3 上小室中加入500μL細胞懸液(2×104 cells)。
2.4 通過進樣口在下小室中加入750μL誘導劑。
2.5 在37℃,5% CO2 條件下孵育培養板和對照板20-22小時(由細胞類型決定)。
2.6 孵育后,小心去除上小室中的培養基及基質膠,避免破壞小室的膜及膜底侵襲轉移的細胞。
2.7 將培養小室轉移到另一塊24孔板中,結晶紫或鈣黃綠素染色。計算。