技術(shù)文章
Technical articlesELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是...
材料與試劑1.抗凝劑(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其鈉鹽或鉀鹽,它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶,進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白,從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1000U/ml,市售肝素多為100U~126U/mg。(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一種螯合劑。用生理鹽水配制成4%的溶液備用。(3)阿氏液(Alsever液),配方如下:枸櫞酸鈉(Na3C6H5O7·5H2O)0.80g枸櫞酸0.0325g葡萄糖2.05g氯化鈉0.42gH2O加至100.00ml...
在體外進行細(xì)胞免疫檢測時,首先必須進行淋巴細(xì)胞的分離。分離淋巴細(xì)胞的方法很多,但不管采用哪種方法,均要求分離的淋巴細(xì)胞純度高、產(chǎn)量多,而且不喪失活性,同時也要求分離技術(shù)簡單、操作方便。外周血液中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的比例在幾百甚至上千比一,兩類細(xì)胞的大小和密度不同,其沉降速度也就不同。紅細(xì)胞的自然沉降率較快,加入高分子量的聚合物,如明膠、右旋糖酐等還可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度離心法或二者結(jié)合,可以將淋巴細(xì)胞從血液中分離出來。這種分離出的淋巴細(xì)胞一般包括單核細(xì)胞。除去單...
一、原理ELI-SPOT,即斑點ELISA,是利用酶標(biāo)板作反應(yīng)容器進行的酶聯(lián)免疫反應(yīng)。其基本原理與ELISA相同。首先用捕獲抗體包被反應(yīng)板,封閉后,依次加入待檢標(biāo)本、生物素化檢測抗體、鏈霉菌抗生物素蛋白-堿性磷酸酶及底物,陽性結(jié)果出現(xiàn)斑點顯色,利用倒置顯微鏡進行斑點計數(shù)。其優(yōu)勢在于可在與體內(nèi)(活體條件)極接近的條件下,在體外對細(xì)胞分泌成分(如細(xì)胞因子、Fas等)進行追蹤研究。幾點說明:l反應(yīng)板:ELI-SPOT所用的反應(yīng)板可以是PVDF膜包被好的,也可以是普通酶標(biāo)板。如用普通...
細(xì)胞內(nèi)鈣離子PH值和其它離子的動態(tài)分析通過Indo-1、Fluo-2、Fluo-3、Calciumgreen、SNARF等多種熒光探針,可對細(xì)胞內(nèi)鈣離子、鈉離子及PH值等作熒光標(biāo)記并對它們進行比率值和濃度梯度變化測定。由于細(xì)胞內(nèi)鈣離子為傳遞信息的第二信使,對細(xì)胞生長分化起著重要作用,通過單標(biāo)記或雙標(biāo)記對細(xì)胞內(nèi)鈣離子和其它離子的熒光強度和分布測定,測定樣品達到毫秒級的快速變化。借助光學(xué)切片功能可以測量樣品深層的熒光分布以及細(xì)胞光學(xué)切片的生物化學(xué)特性的變化。通過不同時間段的檢測可...
Synonyms:ApolipoproteinE2Description:ApoEbelongstoagroupofproteinsthatbindreversiblywithlipoproteinandplayanimportantroleinlipidmetabolism.Inadditiontofacilitatingsolublizationoflipids,theseproteinshelptomaintainthestructuralintegrityoflipo...
脂聯(lián)素的概念A(yù)diponectin(脂聯(lián)素)是脂肪細(xì)胞分泌的一種內(nèi)源性生物活性多肽或蛋白質(zhì).人體內(nèi)的Adiponectin(脂聯(lián)素)由244個氨基酸組成,分子量為30KD.Adiponectin(脂聯(lián)素作為一種胰島素增敏激素(AnInsulin-sensitizingHormone),可以增加促進骨骼肌細(xì)胞的脂肪酸氧化和糖吸收,明顯加強胰島素的糖元異生作用,抑制肝臟的糖生成,是機體的脂質(zhì)代謝和血糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的重要調(diào)節(jié)因子.日本學(xué)者近來證明Adiponectin(脂聯(lián)素)...
人腫瘤壞死因子酶聯(lián)免疫法定量檢測試劑盒HumanTNF-aELISAKit產(chǎn)品描述:腫瘤壞死因子(TNF)是一種具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,主要由激活的單核-巨噬細(xì)胞所分泌,參與機體的免疫調(diào)節(jié)與炎癥反應(yīng),也是某些感染性疾病和肝臟損傷的致病因素。正常人體液中的TNF水平一般在100pg/ml以下,當(dāng)患有某些疾病時,TNF水平可有不同程度增高。因此,檢測患者體液中的TNF水平,具有一定的臨床意義。本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測法測定人血漿或血清中的TNF,包被抗體及檢測抗體采...